产品货号:
SY0299
中文名称:
Bradford蛋白浓度测定试剂盒
英文名称:
Bradford Protein Quantification Kit
产品规格:
500T|2500T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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Bradford蛋白浓度测定法是目前常用的灵敏度较高的蛋白浓度测定方法之一。它是根据Bradford染液(考马斯亮蓝G-250染料)与蛋白结合,使染料的最大吸收峰从A456变为A595,且测定的吸光值与蛋白浓度成正比关系的原理设计的。本法通过吸光值,推算蛋白浓度,实现了蛋白浓度测定的快速性和简便性。灵敏度高,比Lowry法大约高四倍,最低蛋白检测量可达1μg。测定速度快、简单,仅需一种试剂即可,且不受大多数样品中化学试剂的影响。
组分 | 500T | 2500T |
Bradford蛋白染色液 | 125mL | 5×125mL |
蛋白标准品(BSA,2mg/mL) | 5×1mL | 5×2mL |
保存:染色液4℃保存,蛋白标准品常温或4℃保存,有效期一年。
- Bradford染色液使用前,应充分混匀。同时,酶标仪需预热20min。
- Bradford染色液需恢复到室温再使用,有利于提高检测的灵敏度。另,使用前需颠倒几次以充分混匀。
- 由于Bradford染液的颜色反应并不是同递增的蛋白浓度呈线性关系,因此每次试验都必须建立标准曲线。另外,为了得到更精确的结果,每个蛋白梯度和样品均需做复孔。
- Bradford法测定蛋白浓度对大多数化学物质的兼容性比较好,比如对还原剂DTT的兼容性高达5mM。但会受到略高浓度的去垢剂影响,如,SDS需低于0.01%,Triton X-100低于0.05%,Tween 20/60/80低于0.015%等。对于含去垢剂的样品,建议使用BCA蛋白浓度测定试剂盒(货号:SY0298)。
- 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
- 本制品仅作科研用途!
一、配制标准品
标准品稀释液为蛋白样品的溶解液,原则上蛋白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液稀释。但也可用0.9%的NaCl或1×PBS进行稀释。
表一:BSA标准品体系配制(微孔板检测,线性范围100~1500μg/mL)
Vial | 稀释液体积(μL) | 2mg/mL BSA体积(μL) | BSA终浓度(μg/mL) |
A | 0 | 100 | 2000 |
B | 25 | 75 | 1500 |
C | 50 | 50 | 1000 |
D | 125 | 75 | 750 |
E | 150 | 50 | 500 |
F | 350 | 50 | 250 |
G | 375 | 25 | 125 |
H | 395 | 5 | 25 |
I | 400 | 0 | 0=Blank |
二、检测方法
- 标准比色皿检测(线性范围:100~1500μg/mL)
- 各取20μL不同浓度标准品和待测样品加入到反应管中;
- 加入1mL Bradford染色液,混匀。室温孵育10min。
注:样本室温孵育时间不可超过1h; - 分光光度计上测定595nm处的吸光度,用装满水的比色皿对仪器校零。之后测定所有样本浓度。
- 根据BSA标准品的吸光度(减去标准品中空白孔的OD值即最终的读数),绘制标准曲线(X-蛋白浓度μg/mL;Y-最终的OD595nm)。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。
- 各取20μL不同浓度标准品和待测样品加入到反应管中;
- 标准微孔板检测(线性范围:100~1500μg/mL)
- 各取5μL各浓度标准品和待测样品加入到微孔板中;
- 每孔加入250μL Bradford染色液,振荡30s充分混匀。盖上微孔板,室温孵育10min。
注:样本室温孵育时间不可超过1h; - 酶标仪上测定595nm处的吸光度。或者其他575~615nm波长范围内的吸光度,但是相对于595nm,吸光度会存在0~10%的损失。
- 根据BSA标准品的吸光度(减去标准品中空白孔的OD值即最终的读数),绘制标准曲线(X-蛋白浓度μg/mL;Y-最终的OD595nm)。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。
注:- 由于酶标板的光径比比色皿短,经酶标板检测得到的OD595nm会低于比色皿检测所得,因此可能降低本法的检测下限。要得到更高的OD595nm,可使用7~10μL标准品/待检样本,和250μL Bradford染色液来进行检测。
- 如果使用与酶标仪相关的曲线拟合算法(curve fitting algorithm),那么四参数或者最佳拟合曲线可能得到更为精确的结果,并不是单纯的线性拟合。若是手动标记各点浓度,点-点曲线出来的结果精确于线性拟合。若对结果准确性的要求不是非常严格,可使用线性拟合分析数据。
- 由于酶标板的光径比比色皿短,经酶标板检测得到的OD595nm会低于比色皿检测所得,因此可能降低本法的检测下限。要得到更高的OD595nm,可使用7~10μL标准品/待检样本,和250μL Bradford染色液来进行检测。
- 各取5μL各浓度标准品和待测样品加入到微孔板中;
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